1. Matériel :
Les déférents échantillons biologiques analysés durant le stage sont présentés dans le tableau suivant :
Les échantillons
ECB DES URINES
Coproculture et parasitologie des selles
ECB des LCR
Femme
6(02-52ans) :
1/ 15 ans
2/ 20 ans
3/ 2ans
4/ 40 ans
5/ 42 ans
6/ 52 ans 1(40ans)
/
Homme
4(10-50ans) :
1/10 ans
2/ 16 ans
3/ 35 ans
4/ 50 ans
/
/
Enfant
7(1.-4ans) :
1/ 1ans
2/ 3ans
3/ 3.5 ans
4/ 4 ans
4(09mois-10ans) :
1/ 9mois
2/ 1 ans
3/ 7 ans
4/ 10 ans 3 (09 mois)
Tableau 8 : Les déférents échantillons analysés.
Matériel utilisé :
Le total des matériels utilisés pour la réalisation des différents examens biologiques déjà cités sont regroupés dans le tableau suivant :
Tableau 9: Matériel utilisé dans les analyses bactériologiques. (Voir l’annexe).
Matériel biologique Matériel de manipulation Matériel personnel
• Echantillons des urines
• Echantillons des selles
• Echantillons de L.C.R
• • Les bandelettes réactives (pour la chimie des urines) ;
• Un Bec Bunsen ;
• Pipettes pasteur ;
• Micropipettes ;
• Un bain marie, Incubateur ;
• Réfrigérateur ;
• Centrifugeuse ;
• Microscope optique ;
• Lame et lamelle ;
• Cellule Nageotte (cytologie du L.C.R) ;
• Tubes à essai stérile + portoir ;
• Eau physiologie stérile ;
• Ecouvillon stérile :
• Milieux de culture ;
• Blouse propre ;
• Gants à usage unique ;
• Masques ;
• Désinfectant.
2.Examen cytobactériologique des urines :
L’étude cytobactériologique des urines est le test le plus fréquemment fait dans le rayon de microbiologie. Il comporte trois parties :
Chimie des urines.
Uroculture.
Cytologie
Dans le premier jour de l’arrivée de l’échantillon, on fait la chimie des urines qui consiste à utiliser la bandelette urinaire pour mettre en évidence la présence de :
• Albumine.
• Glucose.
• Corps cétoniques.
• Sang.
• pH.
• Bilirubine.
• Nitrite.
La bandelette est trempée dans l’urine et après quelque temps, on fait la lecture en comparant les couleurs de la bandelette avec les références trouvées dans la boite, et on interprète les résultats comme ils montré dans la boite.
la deuxième partie est la cytologie. On prépare l’échantillon pour l’étude microscopique par la centrifugation de urines (3000 tours pendant 3 minutes ou 5000 tours pendant 5 minutes ), et élimination de surnageant. Le culot obtenu est observé sous microscope. On cherche la présence des cristaux, cylindres, cellules épithéliales, leucocytes et hématies.
Dans le même jour, on fait une uroculture ; L’échantillon urinaire est ensemencé sur trois milieux sélectifs : milieu de Chapman pour Staphylococcus aureus, milieu d’Hektoen pour la croissance des bactéries à Gram négatif, et milieu gélose au sang pour les bactéries à Gram positif. Les boites sont incubées à 37 °C pendant 24 heures
Après 24 heures d’incubation, les boites sont observées pour voir la présence des colonies. S’il y a des colonies, les bactéries seront identifiées en utilisant des tests biochimiques classiques et un antibiogramme et parallèlement préparé.
Les tests biochimiques généralement utilisés sont :
TSI (milieu qui permet de détecter la dégradation des sucres et la production de gaz et H2S).
Citrate de Simmons (Ce test étudie l’utilisation de citrate comme seule source de carbone).
Mannitol mobilité (Permet de mettre en évidence la dégradation de mannitol et de voir si la bactérie est mobile ou non).
Urée / indole (permet de mettre en évidence la présence de l’enzyme uréase,
tryptophanase et tryptophane désaminase).
2.Examen cytologique de liquide céphalorachidien
1.2Examen macroscopique
Le LCR est normalement qualifié ( d’eau de roche ) , c’est –à-dire qu’il est incolore , mais il peut être purulent en cas de méningite bactérienne ou rouge/rosé en cas d’hémorragie intracrânienne .
2.2 Examen microscopique
• Cytologie
C’est une méthode quantitative consiste à dénombrer à l’aide d’une cellule Nageotte les éléments cellulaires , ou le LCR normale contient moins de 02 éléments cellulaires par millimètres cubes ( inferieur de 5 éléments ) , sauf chez le nouveau-né 10 à 30 éléments/mm³.
• Méthode d’analyse
A partir de la solution du LCR réaliser une dilution ( volume à volume : 200µL du réactif Lazarus ) en utilisant le diluant Lazarus ( diluant utilisé pour le dénombrement des leucocytes dans le LCR est dans le sang )
3.Copro-parasitologie des selles :
Dans le premier jour, on fait l’enrichissement de l’échantillon en milieu sélénite acide de sodium (SFB). L’incubation est faite pendant 24 heures à 37 °C.
Dans le deuxième jour, le bouillon SFB positif (présence d’un trouble) est ensemencé sur le milieu Hektoen. (Incubation pendant 24 heures à 37 °C).
Dans le troisième jour, on fait l’identification des bactéries obtenues.
1.3 Observation microscopique
Sur une lame, on met un petit fragment de l’échantillon et on lui ajoute du lugol, puis on passe à l’observation microscopique à (x 400) pour la recherche des œufs parasitaires.